# 上午组会 # 脂质提取 ## 肝脏组织破碎 - 共分C、M、O、P、A、H六组，每组10个样品 - 取小鼠肝脏样品，加入两粒钢珠，于冷冻研磨机研磨，参数为20s3次，间隔3s - 研磨样品稀释50倍，BCA法测蛋白质浓度 - 根据蛋白质浓度计算RNA提取时需要加入的试剂量 ## 质谱 - 试剂为1:1的异丙醇甲醇溶液 - 内标法为含15组代表性脂质的标准品 - 涡旋样品匀浆，按1/6.25的比例加入样品、提取试剂和标准品 - 超声孵育10分钟，10000转离心10分钟 - 取上清液于液相小瓶封装 > > **对于内标法定量分析来说，内标物的选择必须满足如下的条件：** > > 1、内标物与被分析物质的物理化学性质要相似（如：沸点、极性、化学结构等）； > > 2、内标物应是该试样中不存在的纯物质； > > 3、它必须完全溶于被测样品（或溶剂）中，且不与被测样品起化学反应；并与试样中各组分的色谱峰能完全分离； > > 4、能加入内标物的量应接近于被测组分； > > 5、色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰的位置相近，或在几个被测组分色谱峰中间。且又不共溢出，目的是为了避免仪器的不稳定性所造成的灵敏度的差异； > > 6、选择合适的内标物加入量，使得内标物和被分析物质二者峰面积的匹配性大于75%，以免由于它们处在不同响应值区域而导致的灵敏度偏差。
# 色谱分离 - 步骤同[3月11日](https://www.int0030.xyz/index.php/archives/968/)，上午、下午分别重复一次。 # 问题 ## 上午 - 上样后，500mL正己烷将使样品吸附于硅胶柱上，分100mL和400mL加入。实际操作时，第一次添加的正己烷过多，可能导致样品被稀释，从而使得洗脱更加困难。 ## 下午 - 上样后，开启空气泵将液面压至与硅胶柱平齐，此时硅胶柱略干，影响未知 - 待虾青素二酯完全洗脱后再更换洗脱液，导致虾青素一酯洗脱时间推后。